大腸桿菌O157：H7顯色培養(yǎng)基是青島海博生物公司改良的培養(yǎng)基，用于食品、病人糞便樣品中O157：H7菌的快速檢測。O157：H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒有藍(lán)色暈圈，大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍(lán)色、藍(lán)色或紫色，菌落周圍有藍(lán)色暈圈；其它細(xì)菌顯藍(lán)色、黃色或無色。本培養(yǎng)基的特異性高，可以克服SMAC培養(yǎng)基引起的假陽性和假陰性結(jié)果，是一種很理想的快速檢測培養(yǎng)基。

稱取本品17.2g 加入200ml 蒸餾水，加熱煮沸溶解并不停攪拌，加熱2分鐘左右。冷卻至45-50℃ 時，加入一支CT添加劑混勻，傾入無菌平皿。

注意：制備好的培養(yǎng)基一定要保持表面干燥，可在36℃ 的培養(yǎng)箱中倒置放置1-2小時。

原理
利用大腸桿菌O157 自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)使菌落顯色，以區(qū)分目標(biāo)菌與非目標(biāo)菌。顯色底物是由產(chǎn)色因子和微生物部分可代謝物質(zhì)組成，在特異性酶作用下，游離出產(chǎn)色因子使菌落顯示一定顏色。

操作步驟

1、按國家標(biāo)準(zhǔn)、SN標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液；

2、取 25 克樣品液加入 225ml  mEC肉湯或mTSB肉湯中，36℃ 增菌培養(yǎng) 18-24 小時；

3、用 3mm 接種環(huán)取 1 環(huán)增菌液，劃線接種到O157菌顯色培養(yǎng)基上，做 2 個平板；

4、36℃ 培養(yǎng) 18-24h，O157:H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒有藍(lán)色暈圈；大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍(lán)色、藍(lán)色或紫色，菌落周圍有藍(lán)色暈圈；其它細(xì)菌顯藍(lán)色、黃色或無色；

5、對典型菌落可做O157:H7菌血清學(xué)試驗(yàn)和全套生化試驗(yàn)。

注：必須在 36℃ 培養(yǎng) 24 小時內(nèi)判讀結(jié)果，以免菌落顏色發(fā)生變化。

質(zhì)量控制

1、外觀

此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻，具有良好的流動性，呈灰白色。制備好的平板呈藍(lán)色固體培養(yǎng)基。

2、微生物試驗(yàn)

在 36℃ 培養(yǎng) 18-24h 小時：

O157顯色培養(yǎng)基 大腸埃希氏菌O157：H7 ATCC35150	O157顯色培養(yǎng)基 大腸埃希氏菌O157：H7 ATCC43888

貯存

制備好的平板可保存 2-5 天，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度 2-8℃，注意避光保存。

失效

干燥培養(yǎng)基超過保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。

注意

此培養(yǎng)基僅供實(shí)驗(yàn)室使用。

參考文獻(xiàn)

1、Rappaport, F., and E. Henig. 1952. Media for the isolation and differentiation of pathogenic Escherichia coli (serotypes 0111 and 055). J. Clin. Pathol. 5:361-362.

2、 U.S. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8 th ed., AOAC International, Gaithersburg, MD.